RESUMEN: Objetivo: describir las características epidemiológicas, clínicas y microbiológicas de la infección del tracto urinario neonatal. Métodos: estudio descriptivo retrospectivo en neonatos con infección urinaria hospitalizados en una institución de Medellín entre enero del 2013 y diciembre del 2017. Se recolectaron datos de las historias clínicas. Las variables cualitativas se expresaron en forma de frecuencias absolutas y relativas, las cuantitativas se presentaron como promedio y desviación estándar o mediana y rangos intercuartílicos. Resultados: se incluyeron 65 pacientes. Los uropatógenos más comunes fueron Escherichia coli (52 %) y Enterococcus faecalis (20 %). Las manifestaciones clínicas más frecuentes fueron la fiebre (46 %), la ictericia (38 %) y las apneas (15 %). La proteína C reactiva elevada se presentó en el 28 % de los casos. En el uroanálisis, el hallazgo anormal predominante fueron las esterasas leucocitarias en el 65 %. Hubo 15 casos (23 %) de infecciones nosocomiales. Por ecografía renal se encontró una malformación genitourinaria en el 25 % de los pacientes. De los 35 neonatos con cistouretrografía miccional hospitalaria, el 17 % tenía reflujo vesicoureteral, el 67 % tuvo ecografía renal normal y el 83 % tuvo un aislamiento diferente a Escherichia coli. Dos pacientes presentaron bacteriemia y uno meningitis. Conclusión: la infección urinaria neonatal tuvo manifestaciones clínicas variadas, donde la fiebre y la proteína C reactiva no fueron marcadores comunes e la respuesta inflamatoria. En este estudio una ecografía renal normal no descarta la posibilidad del reflujo vesicoureteral, por ello debe tenerse en cuenta otros criterios para seleccionar los pacientes que requieren de estudio de reflujo.